２结果分析
２．１组培物生长周龄对超低温保存后细胞生活力的影响细胞抗冻能力的提高与其分裂和生长活动等生理状态密切相关 。 取转移到新鲜培养基上的组培物，考察不同的生长周龄（１，２，３，４，５，６，７周）对组培物经超低温保存后的细胞生活力 。
由图１知，将组培物转移至新鲜培养基上，开始１周，冷冻后细胞的ｔｔｃ值较低，说明细胞的抗冻能力弱，培养至第２周时，ｔｔｃ值迅速升高，细胞抗冻能力显著增强，第５周的ｔｔｃ值最高，此时细胞的抗冻能力最强，此后，随着培养周龄的增加，ｔｔｃ值呈下降趋势，细胞抗冻能力逐渐减弱 。 因此选择５周龄的组培物作为超低温保存的材料是适宜的 。
２．２冷冻保护剂对超低温保存后细胞生活力的影响结果见表１～２ 。
表1u12（12）12均匀设计因子水平（略）
按表１均匀设计搭配，组合成１２种方案进行试验，结果见表２ 。
表2u12（12）12均匀设计实验安排及结果（略）
数据经逐步回归处理，得到方程y＝０．３６９＋０．００４x１２＋４．４９５x６２，r＝０．９０７＞０．９，f＝２０．９２５＞f（７，４）＝１４．６８，方程有显著性意义 。 由方程知，ｘ１２和ｘ２２对ｙ值有显著影响，均与ｙ值呈正相关 。 对方程优化得x１＝１２．５，x６＝０．２５，将其代入方程，得到优化值１．２７５，按公式计算 。 当α＝０．１０，uα＝１．６４４８，计算优化值区间估计为y＝１．２７５±１．６４４８×０．１２，即１．０７８～１．４７２ 。 按照优化条件进行试验，得到ttc值为１．２８１，在y值区域内，且比１２次均匀试验y值都高，说明所得结果是正确的，因此认为１２．５％ｄｍｓｏ＋０．２５％ｌｈ是青天葵组织培养物较佳的冷冻保护剂 。
２．３组培物预培养时间对超低温保存后细胞生活力的影响结果见图２ 。 图２表明，未经预培养的组培物，细胞ttc值最低，抗冻能力较弱，预培养３ｄ后，ttc值开始上升，细胞抗冻能力逐渐增强，到１２ｄ时ttc值达最大，此时细胞抗冻能力最强，此后延长预培养时间，ttc值呈下降趋势，因此试验材料应在４℃预培养１２ｄ后再进行超低温保存 。
２．４降温方式对超低温保存后细胞生活力的影响实验比较快冻法（从０℃直接投入液氮中保存）和两步冷冻法的冷冻效果，着重考察两步法中在－１８℃停留不同时间（０．５，１，２，３，４，５，６，７，８ｈ）对冷冻保存后细胞生活力的影响 。 结果见图３ 。
图3降温方式对冷冻后细胞生活力的影响（略）
图３表明，两步冷冻法的效果优于快速冷冻法，采用两步冷冻法从０℃缓慢降温至－１８℃时，不立即投入液氮中而在此温度下停留１ｈ，冷冻后细胞生活力明显提高，因此降温方式以从０℃降温至－１８℃，停留１ｈ，然后投入液氮保存 。
２．５化霜冻方式对超低温保存后细胞生活力的影响结果见图４ 。 图４表明，冰箱里４℃化冻和４０℃以上高温化冻的ttc值较低，细胞生活力较弱，１０℃和３０℃化冻效果接近，２０℃化冻ttc值最高，说明化冻后细胞保持了较高的生活力，因此２０℃化冻是较好的化冻方式 。
图4化冻方式对冷冻后细胞生活力的影响（略）
２．６超低温保存后组培物的再生长将化冻后的组培物，用无菌的ｍｓ液冲洗后，转移至新鲜培养基上，先黑暗培养２周，后进行光照培养，组培物能够存活，统计存活率为６６．７％，将其转移至新的培养基上根状茎可以继续生长并有新的根状茎从节的部位生出 。
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